ELISA là gì ?
ELISA là viết tắt của “xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết với enzyme”. ELISA được sử dụng rộng rãi như một phương pháp nghiên cứu để định lượng protein hoặc kháng nguyên trong dung dịch chưa biết hoặc trong y học như một công cụ chẩn đoán. Bản chất nhạy cảm và đơn giản của ELISA khiến chúng hữu ích để xét nghiệm mẫu máu để tìm kháng thể bệnh truyền nhiễm, xét nghiệm liên kết giữa kháng thể mới phân lập và protein mục tiêu của nó hoặc nhiều xét nghiệm khác dựa trên liên kết Ag-Ab (tương tác kháng thể-kháng nguyên)
Kỹ thuật ELISA
Kỹ thuật ELISA bắt đầu bằng một đĩa 96 giếng, trong đó vật liệu của các giếng cho phép protein bám vào bề mặt. Sự cố định cho phép kháng nguyên được liên kết với kháng thể phát hiện của nó và sau đó rửa sạch mọi kháng thể không liên kết, tiếp theo là đo kháng nguyên. Một enzyme liên kết với kháng thể phát hiện sẽ tương tác với một chất nền được thêm vào trong bước cuối cùng để tạo ra tín hiệu tỷ lệ thuận với kháng nguyên,
Bốn loại elisa chính?
Có bốn cách thiết lập ELISA liên quan đến kháng thể và kháng nguyên
- Direct ELISA: Kháng nguyên được gắn trực tiếp lên giếng và phát hiện bằng kháng thể liên kết enzyme.
- Indirect ELISA: Kháng nguyên gắn vào giếng, phát hiện bởi kháng thể sơ cấp và sau đó là kháng thể thứ cấp liên kết enzyme.
- Sandwich ELISA: Sử dụng hai kháng thể đặc hiệu: một kháng thể cố định để bắt giữ kháng nguyên và kháng thể khác để phát hiện.
- Competitive ELISA: Đo tín hiệu gián tiếp của kháng nguyên hoặc kháng thể bằng cách cạnh tranh với một chất chuẩn.
*Các bước đọc ELISA
Giai đoạn chuẩn bị: Kháng nguyên hoặc kháng thể được gắn cố định vào bề mặt của giếng trong đĩa vi thể. Mẫu thử được thêm vào giếng, nơi các kháng nguyên hoặc kháng thể cần đo sẽ gắn kết với thành phần đối ngược.
- Rửa: Các chất không liên kết sẽ được rửa sạch để đảm bảo chỉ các liên kết đặc hiệu còn lại.
- Thêm enzyme liên hợp: Kháng thể thứ cấp liên kết với enzyme được thêm vào để gắn với kháng nguyên hoặc kháng thể đích.
- Phản ứng enzyme: Substrate (cơ chất) phù hợp với enzyme được thêm vào. Enzyme xúc tác phản ứng, tạo ra sản phẩm có màu, huỳnh quang hoặc tín hiệu khác.
- Đọc kết quả: Máy đọc ELISA đo tín hiệu (độ hấp thụ ánh sáng hoặc cường độ huỳnh quang) để xác định nồng độ của chất cần đo.
Ứng dụng cụ thể của máy đọc ELISA
1. Trong y học:
-
Xét nghiệm phát hiện bệnh:
-
Bệnh truyền nhiễm: HIV, viêm gan B, viêm gan C, COVID-19.
-
Bệnh tự miễn: Lupus ban đỏ, viêm khớp dạng thấp.
-
-
Đo nồng độ hormone (ví dụ: insulin, cortisol) hoặc cytokine trong máu.
2. Trong nghiên cứu khoa học:
-
Nghiên cứu về cơ chế miễn dịch, biểu hiện protein.
-
Phát triển thuốc, kiểm tra hiệu quả vaccine.
3. Trong công nghiệp thực phẩm:
-
Phát hiện dư lượng thuốc trừ sâu, kháng sinh trong thực phẩm.
-
Phân tích chất gây dị ứng (gluten, lactose) trong sản phẩm.
4. Trong kiểm tra môi trường:
-
Đo lượng độc tố, vi khuẩn, hoặc chất gây ô nhiễm trong nước và đất.
Máy đọc elisa, nguyên lí hoạt động của của các loại máy phổ biến
Máy đọc ELISA (ELISA Reader) là thiết bị chuyên dụng dùng để đo cường độ ánh sáng trong các xét nghiệm ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Đây là bước cuối cùng của quá trình phân tích ELISA, giúp định lượng các chất như kháng nguyên, kháng thể, protein hoặc hormone trong mẫu thử. Máy đọc elisa có thể đo lường độ hấp thụ ánh sáng ở nhiều bước sóng khác nhau, đọc nhiều mẫu cùng một lúc thường là 96 hay 384 mẫu trên một khay.
Một số máy đọc elisa đang được phân phối tại ANHOACO (LH: 0819.320.816 để được tư vấn chọn lựa sản phẩm)
Máy đọc ELISA - Model: MPR-A100, Hãng: AS ONE/ Nhật bản
Máy đọc elisa 96 giếng model: AC3000, Hãng Azure Biosystems / USA
Máy đọc Elisa Model: SmartReader™ Multimode, Hãng: Accuris/ USA
Viết bình luận